植物組織培養方面的實驗操作經驗總結
剛開始接觸植物組織培養這方面的實驗，實驗操作中許多需要注意的事項還不是很清楚，希望能夠得到大家的幫助，減少實驗污染。
培養基，器皿滅菌，超凈臺使用前Zui好紫外照至少半個小時，操作前把手洗凈并用70%乙醇涂抹殺菌，操作時在酒精燈燈焰附近，但要注意不要燙傷植物材料。剛開始做染菌總是不可避免的，操作幾次熟練了就沒問題了
初代培養：
1、外植體的選擇及消毒：
幼年組織比老年組織具有較高的行態發生能力。外植體的大小莖段長0.5cm，葉片面積5mm2。 把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放入為宜。在超凈臺用70％酒精消毒10-30s；用殺菌劑0.1%升汞處理5-20 min；
用無菌水涮洗幾次，每次不少于3min，以盡量去除殘毒。
2、無菌操作
? ? ⑴ 超凈工作臺滅菌??開始無菌操作前半小時，打開超凈工作臺上的紫外燈，照射20分鐘后，關閉紫外燈，使超凈工作臺正常送風，10分鐘左右后，即可開始無菌操作。
? ? ⑵ 雙手及接種器械滅菌??進行無菌操作前，先用肥皂洗滌雙手，穿好工作服。用70％～75％的酒精擦拭臺面并消毒雙手。所有接種器械用75％酒精浸泡，在酒精燈上灼燒滅菌。
? ? ⑶ 接種??切去材料兩端各0.5cm左右長度莖段，將莖段接種到初代培養基上。在培養容器上標明培養基代號和接種日期。
3、污染的原因及對策
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污染：組培過程中培養基和培養材料滋生雜菌導致培養失敗現象。? ?
（1）污染的原因
外植體帶菌，培養基滅菌不徹底，操作員不遵守操作規程等。細菌污染??在接種后1-2天可發現，菌斑呈粘液狀。
真菌污染在接種3天后可發現，污染部分長有不同顏色的霉菌。
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（2）污染的預防措施
將取的枝條用水沖干凈后插入自來水中使其抽枝，用新抽的枝作外植體。
晴天中午到下午采樣；
操作人員嚴格遵守操作規程接種；
培養基及其用具滅菌要徹底。